發(fā)布時(shí)間： 2020-10-26 點(diǎn)擊次數(shù)： 2690次
PCR儀的PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增任何目的DNA。可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達(dá)調(diào)控，基因多態(tài)性研究等許多方面。
梯度溫度控制是幫助用戶進(jìn)行PCR優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的特性之一，以便確定PCR實(shí)驗(yàn)方案的佳溫度和保持時(shí)間，盡量減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)。在理論上，真正的梯度應(yīng)在均勻的金屬加熱模塊上顯示線性溫度斜率。
然而，傳統(tǒng)梯度PCR儀通常只采用單一的熱模塊并通過(guò)位于兩端的兩個(gè)加熱及冷卻元件進(jìn)行溫度的控制。該設(shè)計(jì)經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致以下限制：
1.僅能設(shè)置兩個(gè)溫度：在熱模塊的兩端設(shè)置引物退火的高、低極限溫度。因此，無(wú)法在模塊間實(shí)現(xiàn)其他區(qū)域溫度的準(zhǔn)確設(shè)置。
2.由于不同列之間的熱學(xué)相互作用，模塊上不同區(qū)域之間的溫度更可能遵循的是S形的曲線變化而非真正的線性梯度。
新型梯度PCR儀可實(shí)現(xiàn)更好的引物退火溫度控制。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計(jì)帶有三個(gè)或更多分割金屬模塊的PCR儀，每一模塊都具有獨(dú)立的加熱和冷卻元件。選擇能夠準(zhǔn)確進(jìn)行梯度溫度控制的PCR儀將大大節(jié)省優(yōu)化所需時(shí)間，找到佳的退火溫度和時(shí)間，并確保在梯度模式下優(yōu)化的條件在正常模式下也能獲得相同的結(jié)果。
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